利用基因技术分析不稳定血红蛋白病

　　异常血红蛋白病是由于珠蛋白基因的突变异致珠蛋白肽链结构发生异常的一类血红蛋白分子病，其中珠蛋白基因的突变包括：单个碱基替 代，密码子的缺失与插入，移码突变，终止密码突变，融合突变（编码两条不同肽链的基因发生重排而形成融合基因）。可通过DNA检 测分析和RNA检测分析进行诊断。

　　1.DNA检测与分析 如Hb D Punjab是我国常见的一种异常血红蛋白病；它是由血红蛋白b链第121位密码子由GAA（谷氨酸）突变为CAA（谷氨酰胺） 所致。该突变同时使限制酶EcoR I位点消失（GAATTC?CAATTC），应用PCR技术结合限制酶酶谱分析即可快速、简便地鉴定该疾病。具体方法是 扩增b珠蛋白基因第3个外显子的大部分和基因3￠ 端的DNA序列，共长144bp，用EcoR I消化后，在电泳凝胶上可以观察到40bp和104bp两个片段，然而在Hb D Punjab杂合子，扩增DNA经EcoR I消化后就同时具有144bp和104+40bp两种类型。

　　又如镰刀形红细胞性贫血症是由于b珠蛋白基因的第6位密码于由GAA突变为GUA，导致HbS的b链第6位的谷氨酸被缬氨酸替代 。镰刀形红细胞性贫血症的基因诊断可采用：①PCR/限制酶谱分析法，扩增的294bp b珠蛋白基因片段不能被Oxa N I酶切，电泳图仅见294bp片段。正常人的扩增片段，可被该酶切成191bp和103bp两个片段。②合成特异的寡核苷酸探针 进行Southern印迹杂交分析。

　　2.RNA检测与分析 直接测定异常血红蛋白病人珠蛋白mRNA的RT-PCR产物序列，可准确鉴定出基因编码区的碱基变化，进而推导出胎链中相应氨基 酸的改变。

　　3.产前诊断出严重的血红蛋白病，及时终止妊娠是预防的重要前提，目前国内尚未广泛开展。