叶酸缺乏的可靠证据是测定血清叶酸，正常血清叶酸水平为13.4～47.67nmoL/L，如低于6.8nmoL/L即可诊断为叶酸缺乏。

　　辅助诊断指标有组氨酸负荷试验，呈阳性反应者有助于诊断。

　　在临床上对病因不明的多发性周围神经病，小脑及脊髓病，精神迟钝及痴呆，有器质性精神障碍和长期服用抗癫痫药物者，婴幼儿出现不明原因的精神、神经系统症状时，测定血清叶酸有助于鉴别诊断。